一直以来肝素检测及低分子量肝素分子量分布检测客户多选择Tosoh SWxl系列凝胶过滤柱。自2019年4月以来，由于厂商停产使Tosoh凝胶柱出现全球断供导致国内余量不多的库存出现抬价出售情况。 以及复产后批次凝胶柱柱效波动较大 ，对客户肝素检测数据收集和结果准确性产生影响。
为了应对这种情况，阿斯雷尔生物技术为客户提供替代方案：纳谱BioCore SEC凝胶柱。
我们利用BioCore SEC-HP色谱柱进行肝素和低分子肝素的分子量检测。检测结果显示，该系列色谱柱对肝素及低分子肝素的分离效果优异，满足药典方法规定的系统适应性要求。此外，与肝素行业当前广泛使用的SEC柱相比，该色谱柱具有更好的分辨率和更好的耐用性。
在当前的药典方法中，肝素分子量的测定使用体积排阻（SEC）色谱柱进行分离，利用示差折光检测器（RID）进行信号检测，通过高效液相色谱仪进行。选择合适的色谱柱对检测结果的准确度至关重要。然而，当前肝素行业广泛使用的SEC柱的使用寿命很短，单次进样成本较高。
BioCore SEC-HP色谱柱是专为肝素分子量检测而研发的一系列SEC柱。我们利用该系列色谱柱，分别进行了肝素和低分子量肝素的系统适用性测试，以及低分子量肝素的色谱柱耐用性测试。系统适用性测试结果显示，该系列色谱柱具有优异的分离性能，校准曲线的相关系数达到0.999以上，完全可替代现有的进口产品。耐用性测试表明，该系列色谱柱使用寿命更长，进样针数为现有产品的数倍（多达100针左右），可有效降低单次进样的成本。
实验
仪器
色谱仪：Shimadzu LC-2030C 高效液相色谱系统
检测器：RID-20A 示差折光检测器
色谱柱： ：见表 1
试剂
标准品：肝素分子量对照品（中国药典委员会），肝素对照品（中国药典委员会），低
分子量肝素分子量校准品（欧洲药品质量管理局）
待测样品：低分子量肝素钠（由国内客户提供）
实验步骤
肝素系统适应性部分参考《中国药典 2015 版》 [1] 。
低分子量肝素系统适应性部分及耐用性测试部分参考《European Pharmacopoeia 9.8》
[2] 。
结果与讨论
肝素系统适用性测试
将肝素分子量对照品溶液注入色谱系统，记录色谱图，如图 1。
通过肝素分子量对照品附带的宽峰表，鉴别组分峰，结果如表 3。
通过三阶多项式拟合，可得到分子量与保留时间之间的数学关系（校准曲线），如图2。
将肝素对照品溶液注入色谱系统，记录色谱图，得到图 3。
低分子量肝素系统适应性测试
低分子量肝素（如依诺肝素钠）的 SEC 色谱图展现了较为精细的组分峰结构，低分子量
组分峰的分离程度是色谱柱柱效的直观反映。
将低分子量肝素分子量校准品溶液注入色谱系统，记录色谱图，如图 4。
检查图 4 中低分子量肝素分子量校准品对应的宽峰，可见较低分子量的组分峰得到了很
好的分离。其中，最后两个组分峰（对应分子量分别为 1200 和 600）之间接近基线分
离，如图 5。
通过低分子量肝素分子量校准品附带的宽峰表，鉴别组分峰，结果如表 4。
通过三阶多项式拟合，可得到分子量与保留时间之间的数学关系（校准曲线），如图 6。
耐用性测试
肝素样品具有非常复杂的组成，给色谱柱耐用性提出了巨大的挑战。为测试 BioCore
SEC-HP 色谱柱的耐用性，我们用低分子肝素样品溶液进行了多次连续进样，并比较重叠
色谱图。
在图 7 中，我们可看到，即使在不用保护柱的条件下，连续 30 针进样的色谱图之间差
异非常小。
串联保护柱后，分别考察进样体积 5 μL 和 25 μL 的 连续 10 针进样，色谱图之间的差异
极小，如图 8 和图 9。
结论
BioCore SEC-HP 色谱柱的分离性能主要得益于其单分散、低吸附的高性能硅胶填料。通
过扫描电镜（SEM）分析，可清晰地看到不同填料之间的差异。
如图 10 所示，BioCore SEC-HP 填料的粒径分布极窄，平均粒径为 5 μm，变异系数<5%，
优于其他填料。
色谱柱的耐用性（使用寿命）也是使用中需要考量的重要因素。根据肝素行业客户的反
馈，原有的 SEC 柱在 10-20 针进样后，色谱图出现了较大的差异，表明色谱柱已失效。
与此相反，BioCore SEC-HP 色谱柱展现了更长的使用寿命，即使在 50-60 针进样后也无
明显的性能损失。根据低分子量肝素行业客户的试用反馈，BioCore SEC-150HP 色谱柱甚
至达到了 100 针以上的使用寿命。
BioCore SEC-HP 色谱柱的耐用性可归功于其填料的机械强度。为考察不同填料的机械强
度，我们进行了 6000 psi 压力下的装柱操作，并拍摄了填料的 SEM 以检查其破损程度。
如图 11 所示，BioCore SEC-HP 无颗粒破损，而其他填料则出现了明显的颗粒破裂。
结果显示，BioCore SEC-HP 色谱柱具有优异的分离性能和良好的耐用性，完全适用于肝素
分子量检测。
参考文献
- 国家药典委员会. 《中华人民共和国药典（2020 版 二部）》. 北京:中国医药科技出
版社; 2020.6. 肝素钠; 637-638. - Council of Europe. European Pharmacopoeia. In: Supplement 9.8. Strasbourg: Council of Europe; 2019. p. Heparins, Low-Molecular-Mass; pp.6923-6924.
