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依诺肝素钠成环率检测，欧洲药典版

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依诺肝素钠（Enoxaparin Sodium）是通过化学降解法从普通肝素制备的低分子肝素，由结构复杂、长度不一的多糖链组成，重均分子量约为4500 Da。在制备过程中，有一定比例的多糖链在其还原端形成了1,6-脱水环状结构。该1,6-脱水环状结构的百分比即为成环率，是依诺肝素钠区别于其他肝素类药物的主要特征。

依诺肝素钠中的1,6-脱水环状结构
依诺肝素钠中的1,6-脱水环状结构

我们利用Asnail原生肝素酶和Ultimate SA-SAX色谱柱，检测了依诺肝素钠样品的成环率。检测结果完全符合欧洲药典规定的系统适用性要求，同时可大大降低单次检测的成本。

典型色谱图

依诺肝素钠酶解溶液（未还原）色谱图
依诺肝素钠酶解溶液（未还原）色谱图
依诺肝素钠酶解还原溶液色谱图
依诺肝素钠酶解还原溶液色谱图

酶解适应性

肝素酶降解效果，其中21号峰为1,6-脱水∆IS-IS，13号峰为1,6-脱水∆IS
肝素酶降解效果，其中21号峰为1,6-脱水∆IS-IS，13号峰为1,6-脱水∆IS

酶解适应性对应1,6-脱水∆IS-IS与1,6-脱水∆IS之间的峰面积之比，为0.59，满足欧洲药典的酶解适应性要求（不超过1.15）。

还原适应性

硼氢化钠还原效果，其中16号峰为未还原∆IS，15号峰为还原∆IS
硼氢化钠还原效果，其中16号峰为未还原∆IS，15号峰为还原∆IS

还原适应性对应∆IS与还原∆IS之间的峰面积之比，为0.005，满足欧洲药典的还原适应性要求（不超过0.02）。

柱效适应性

色谱柱分离效果，其中12号峰为还原∆IA，13号峰为1,6-脱水∆IS
色谱柱分离效果，其中12号峰为还原∆IA，13号峰为1,6-脱水∆IS

柱效适应性对应还原∆IA与1,6-脱水∆IS之间的分离度，为1.64，满足欧洲药典的柱效适应性要求（不小于1.5）。

此外，即使是较难分离的一对异构体，在本实验中也能顺利分离。如下图所示，在其他色谱柱中常常发生共流的1,6-脱水∆IIS及其异构体1,6-脱水∆IISepi形成了两个色谱峰，分离度为1.13。

一对1,6-脱水残基异构体的分离效果，其中5号峰为1,6-脱水∆IIS，6号峰为1,6-脱水∆IISepi
一对1,6-脱水残基异构体的分离效果，其中5号峰为1,6-脱水∆IIS，6号峰为1,6-脱水∆IISepi

耐用性测试

酶解还原溶液重叠色谱图，分别对应第8、16、20、24针进样
酶解还原溶液重叠色谱图，分别对应第8、16、20、24针进样

根据我们的经验及客户反馈，Ultimate SA-SAX色谱柱的分离度下降幅度与Waters Spherishorb SAX色谱柱相当。